細胞培養——細胞復蘇

細胞培養是指從生物體取出組織，分離的原代細胞或細胞系，在體外模擬體內生理環境（無菌，適宜溫度，PH值和一定營養條件）等特定的條件下培養，使之生存并生長。細胞培養是生命科學的基礎，目前細胞培養工作已廣泛應用于生物學、醫學、新藥研發等各個領域。

這期主題主要圍繞細胞培養，向大家簡單介紹細胞培養相關的一些內容，如細胞培養的具體流程、細胞培養所需的條件、細胞培養的注意事項及問題分析等。細胞培養的具體流程主要分為:細胞復蘇、細胞傳代、細胞凍存。

本期讓我們先來了解一下

——關于細胞復蘇的相關內容

一、什么是細胞復蘇？

細胞復蘇是將休眠的細胞重新活化,使之重新生長進入細胞周期,進而分裂產生子細胞的過程。

二、細胞復蘇的實驗操作步驟

1、從液氮罐或-80℃冰箱中取出凍存管，用冰盒將其轉移至細胞房，迅速將凍存管投入到已經預熱的水浴鍋中迅速解凍，并不斷的搖動，使管中的液體迅速融化。

2、約1-2min后凍存管內液體完全溶解，取出用酒精棉球擦拭或酒精噴灑凍存管的外壁，再拿入超凈臺內，用移液槍將細胞液轉移至含有5mL完全培養基的15mL離心管中，1000rpm離心5min。

3、棄去上清，用1mL完全培養基重懸細胞團塊，制備細胞懸液，然后將細胞懸液加進含有4mL完全培養基的細胞培養瓶中，蓋上瓶蓋混勻。

4、將細胞培養瓶放入37℃、5%CO2培養箱中培養。

注意事項

1.細胞復蘇的原則為快速融化：必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃，使細胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶，對細胞造成損害。

2.水浴鍋一定要提前預熱到37℃。

3.一次性在水浴鍋內融化的凍存管不要太多，會導致傳熱不佳，延長融化時間，對細胞造成損害。

4.實驗過程中每次將物品拿進超凈臺中前，一定要向其噴灑75%酒精消毒，或用酒精棉球擦拭，防止污染，實驗全程無菌操作。

5.對于某些細胞比較脆弱，完全培養基需要提前預熱后再使用。

（發布于：2022-06-14）